細菌內(nèi)毒素（脂多糖）提取法之三氯醋酸法及酚水法的介紹

內(nèi)毒素系革蘭氏陰性菌細胞壁外膜中的脂多糖（Lipopoly saccharide，LPS）成分。在維持外膜的結(jié)構(gòu)、通透性以及臨床陰性菌感染中均起著重要的作用。以化學(xué)方法提取的LPS注射動物能重復(fù)革蘭氏陰性菌感染期間所出現(xiàn)的多種病理反應(yīng)，故實驗動物應(yīng)用提取的LPS可更好地了解LPS的致病作用并尋找可能的防治對策。

一、三氯醋酸法（Trichloroacetic Acid，TCA）

TCA法是Boivin等（1933）首先應(yīng)用的，借助0.25N TCA，在4℃可將LPS從濕菌或經(jīng)丙酮干燥的細菌中提取出來，加入2倍體積的冷乙醇即可取得LPS的沉淀物。用這種方法提取的產(chǎn)物，嚴(yán)格地講是一種LPS-蛋自質(zhì)復(fù)合物，這種復(fù)合物即方早期所稱的Boivin抗原。TCA法提取的LPS產(chǎn)量較高，具有很好的抗原性，對O特異性側(cè)鏈抗體有血清學(xué)特異反應(yīng)，可結(jié)合補體和致敏紅細胞，分子量達幾百萬，但蛋白質(zhì)含量很高，故純度較差。目前這一方法已較少使用。

二、酚水法

這一方法是Westphal等于1952年提出的，該法是目前應(yīng)用最-廣泛的方法。酚水法主要用于S型細菌LPS的提取，亦可用于R突變型細菌LPS的提取，但產(chǎn)量稍低。酚水法提取液所含的苯酚與水的比例是45 : 55。當(dāng)提取液加熱至68℃并維持5分鐘時，苯酚和水形成了一個單一的相，冷卻至4℃后，形成了兩個相，分別為苯酚相（被水飽和）和水相（被苯酚飽和）。核酸、多糖及LPS大部分溶解于水相中，而大部分蛋白質(zhì)溶解于苯酚相中，不溶性物質(zhì)沉淀在兩相交界處。

含LPS的水相經(jīng)吸取、透析<去除苯酚）并干燥后即為LPS的粗制品。LPS粗制品經(jīng)超離心1000000×g，可得到精制的LPS。精制后的LPS，尚含有多糖成分及與其共價結(jié)合的類脂體A成分、小量的肽（1～3 %）。這種提取物對人、兔的抗原較弱，但能展示O特異性側(cè)鏈抗原反應(yīng)。內(nèi)毒素毒性較強，致敏紅細胞不明顯，能結(jié)合補體，分子量有幾百萬。產(chǎn)量僅1~4 %（占干菌重）。