各國法定檢測內(nèi)毒素的方法

美國首先將LT法（鱟變形細胞溶解物試驗）作為檢測內(nèi)毒素的法定方法。在美國藥典第20版（1980）的細菌內(nèi)每素一項中對LT法亦進行了詳細的介紹。繼美國以后，許多國家（特別是歐洲國家）紛紛仿效，亦已將LT法作為檢測內(nèi)毒素的法定方法?，F(xiàn)以美國為例，來說明這種法定的LT法。

美國食品藥品管理局（FDA）對廠家提出了一條準(zhǔn)則。FDA認為對于應(yīng)用于人類的藥物、生物制劑、獸用藥物及醫(yī)療器械必須將LT法作為法定的終產(chǎn)品（end product）內(nèi)毒素檢測方法，廠家只有遵循這個原則并按介紹的方法操作后，其產(chǎn)品才能得到FDA的承認。

LT法作為法定的內(nèi)毒素檢測方法，在進行測定時必需作①測定鱟試劑的敏感性；②抑制與增強試驗。

1.鱟試劑的敏感性

在鱟試驗的操作過程中，各個實驗室之間必定有差異。檢測人員必須應(yīng)用同一批鱟試劑及同一批內(nèi)毒素作4~8個稀釋度的試驗，以2倍倍比稀釋以便取得適宜的終點范圍作LT。終點內(nèi)毒素量應(yīng)以ng/ m1表示，然后換算成log值，計算標(biāo)準(zhǔn)差（SD）。如果4個稀釋度的SD值小于或等于SD值的99%限值，則此方法是可用的。如SD超過比值，則應(yīng)采用8個稀釋度的試驗，計算新的SD值。此時，如SD值仍超過8個稀釋度SD的99%上限值，則此方法由于變異太大不能采用。在重新試驗前應(yīng)找出原因并進行糾正。

如實驗室通過了上述變異試驗，則應(yīng)以一系列濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（RSE）或?qū)φ諛?biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（CSE）檢查鱟試劑的敏感性，如果鱟試劑的敏感性差異不超過標(biāo)定值的2倍稀釋，則認為是滿意的。

2.抑制與增強試驗

一種藥物含不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)毒素（敏感性以鱟試劑標(biāo)定》，然后與水中的一系列同種內(nèi)毒素濃度進行比較。標(biāo)準(zhǔn)系列的內(nèi)毒素檢測結(jié)果與藥物中的內(nèi)毒素檢測含量進行比較，其差異不應(yīng)超過兩倍稀釋濃度。原則說明此種藥物有抑制或增強現(xiàn)象。

由不同濃度不同活性要素組成，而其它成分相對恒定的藥物，只需測最高和低濃度即可，如果每種濃度均表明有抑制或增強，則每種濃度均需進行抑制/增強試驗。

所有法定的藥物檢測均需在未稀釋或在適當(dāng)稀釋后測定。稀釋倍數(shù)不能超過最大有效稀釋（Maxium Valid Dilution，MVD），否則其中的內(nèi)毒素經(jīng)稀釋后濃度過低而不被LT法檢出。

如果藥物表明有抑制或增強現(xiàn)象，則應(yīng)服從RT法。此時，RT法仍將是檢測藥物內(nèi)毒素含量的適宜方法。至少應(yīng)檢測3個生產(chǎn)批次終產(chǎn)品的抑制及增強試驗。如果藥物的加工制造過程改變，或藥物的配方或藥物中某種特殊要素的來源改變，則每種藥物至少要對3種單位重復(fù)測定抑制/增強試驗。如鱟試劑的生產(chǎn)或鱟試劑批號更變時，至少每種藥品要對1種單位進行重復(fù)測定。